Azul de metileno, opción para la marcación de cáncer colorrectal pre procedimiento mínimamente invasivo. Reporte de caso

El cáncer colorrectal es una patología común que causa aproximadamente 861,000 muertes al año. Se presenta el caso de un paciente masculino de 50 años, con hipertensión arterial y Diabetes mellitus tipo II, con diagnóstico de neoplasia en colon descendente, al cual se le realizó procedimiento mínimamente invasivo, posterior a marcación tumoral con azul de metileno por medio de endoscopia de vías digestiva bajas. Postoperatorio adecuado, sin complicaciones. El tratamiento de elección para el cáncer colorrectal sin metástasis es la exeresis oncológica. Actualmente, el manejo quirúrgico recomendado es por medio de procedimiento mínimamente invasivo, sin embargo, es un desafío puesto que en algunos casos la identificación de la lesión es difícil y adicionalmente requiere una curva de aprendizaje pronunciada. Por lo anterior, utilizamos el azul de metileno para la marcación del tumor previo procedimiento, con excelentes resultados, sin complicaciones. La marcación tumoral con azul de metileno previa al procedimiento mínimamente invasivo es seguro, útil, económico y de bajo riesgo.

Colorectal cancer is a common pathology, causing approximately 861,000 deaths a year. The case a 50-year-old male patient, with arterial hypertension and type II diabetes mellitus, with a diagnosis of neoplasia in the descending colon, which was performed minimally invasive procedure, after tumor marking with methylene blue by means of endoscopy of lower digestive tracts. Adequate postoperative period, without complications. The treatment of choice for colorectal cancer without metastasis is oncological exeresis. Currently the recommended surgical management is by means of a minimally invasive procedure, however, it is a challenge since in some cases the identification of the lesion is difficult and additionally requires a pronounced learning curve. Therefore, we use methylene blue for the marking of the tumor after the procedure, with excellent results, without complications. Methylene blue tumor marking prior to the minimally invasive procedure is safe, useful, inexpensive, and low risk.

Novas estratégias terapêuticas para o controle de biofilmes orais: terapia fotodinâmica e sistema carreador de antimicrobianos / New therapeutic strategics for the control of oral biofilms: photodynamic therapy and drug delivery system

Os biofilmes orais possuem grande relevância clínica por estarem associados com o desenvolvimento de cárie dentária e candidose bucal, que são doenças infecciosas frequentemente encontradas na população. O presente trabalho foi dividido em dois estudos: Estudo 1 que teve como objetivo analisar os efeitos da terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa), mediada por Fotoenticine (FTC) e Azul de Metileno (AM), sobre biofilmes microcosmos de cárie dentária; e Estudo 2 cujo objetivo foi avaliar o gellan gum como biomaterial para carreador do antifúngico Ester fenetil do ácido caféico (CAPE) contra Candida albicans. No estudo 1, amostras de dentina cariada foram coletadas de diferentes pacientes para formar biofilmes microcosmos in vitro. Os biofilmes foram tratados com FTC ou AM associado à irradiação LED a 660 nm (28,5 J/cm²). Os dados foram analisados pela contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC/mL). Além disso, a biomassa, estrutura do biofilme e produção de ácidos pelos microrganismos foram determinadas por análises microscópicas ou espectrofotométricas. Os biofilmes de diferentes pacientes apresentaram variações na composição microbiana, sendo formados por estreptococos, lactobacilos e leveduras. No geral, a TFDa diminuiu 3,7 Log10 do total de microrganismos, 2,8 Log10 de estreptococos, 3,2 Log10 de lactobacilos e 3,2 Log10 de leveduras, e atingiu a erradicação de estreptococos do grupo mutans. A TFDa também foi capaz de reduzir a biomassa, desagregar os biofilmes e diminuir a concentração de ácidos em 1,1 a 1,9 mmol de lactato/L. Em relação ao estudo 2, inicialmente, foram preparadas formulações do CAPE em diferentes concentrações de gellan gum (0,6 a 1%). As formulações foram avaliadas em relação ao sistema de liberação e ação antifúngica contra C. albicans. Verificou-se que concentrações mais altas de gellan (0,9 e 1%) levaram a uma liberação mais prolongada do CAPE em relação as concentrações mais baixas. Os valores de concentração inibitória mínima do CAPE sobre C. albicans foram aumentados quando esse composto foi incorporado no gellan. As formulações de CAPE em gellan apresentaram atividade antifúngica tanto em culturas planctônicas como em biofilmes de C. albicans, sendo esses efeitos dependentes do tempo de tratamento. O CAPE e suas formulações em gellan também levaram a uma diminuição da atividade proteolítica de C. albicans. Concluiu-se que a TFDa mediada por Fotoenticine e o sistema carreador de gellan gum podem ser estratégias terapêuticas promissoras para o controle dos biofilmes na cavidade bucal, podendo ser usadas respectivamente no tratamento da cárie e candidose. (AU)

Dental caries and oral candidiasis are infectious diseases frequently found in the population. The present work is divided into two studies, study 1 time as objective: To analyze the effects of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), mediated by Fotoenticine (FTC) and Methylene Blue (MB), on dental caries microcosm biofilms. In study 2, the objective was to evaluate gellan gum as a biomaterial to carry the antifungal caffeic acid phenethyl ester (CAPE) on Candida albicans. To conduct study 1, carious dentin samples were collected from different patients to form in vitro microcosm biofilms. The biofilms were treated with FTC or MB associated with 660 nm red LED irradiation, with energy dose of 28.5 J/cm² and power dose of 40 mW/cm². The data were analyzed by the count of Colony Forming Units (CFU/mL). In addition, the biomass, biofilm structure and acid production of the microorganisms were determined by microscopic or spectrophotometric analysis. The biofilms from different patients showed variations in microbial composition, being formed by streptococci, lactobacilli, and yeasts. Overall, aPDT decreased 3.7 Log10 of total microorganisms, 2.8 Log10 of streptococci, 3.2 Log10 of lactobacilli and 3.2 Log10 of yeasts, and achieved eradication of mutans group streptococci. PDTa was also able to reduce biomass, disaggregate biofilms, and decrease acid concentration by 1.1 to 1.9 mmol lactate/L. For study 2 of this, first the standards of CAPE were determined, such as minimum inhibitory concentration, and absorption peak, then CAPE was incorporated into gellan gum, and then the standard curve test and analysis of CAPE release was performed, finally the formulations were tested on planktonic culture and biofilm of different strains of C. albicans, it was also analyzed the action of this drug on the production of Sap. The MIC found varied from 32 to 64 µg/mL, the release tests showed a gradual release in the higher formulations, finally in the CFU/mL count both in planktonic culture and biofilm the formulations were able to inhibit the fungus. With this it is concluded that both aPDT for oral microcosm and gellan gum as caregiver of CAPE for Candida albicans inhibition are promising. (AU)

Clinical and toxicological findings in nitrate and nitrite poisoning in cattle in Northeastern Brazil / Achados clínicos e toxicológicos na intoxicação por nitrato e nitrito em bovinos no Nordeste do Brasil

We report two outbreaks of nitrate and nitrite poisoning in Paraíba, Northeast Brazil. The first, due to Pennisetum purpureum (elephant grass), and the second, due to P. purpureum and Brachiaria spp. (brachiaria grass), both occurred during a prolonged drought. In the first outbreak, the irrigation of the pastures with wastewater and sewage contributed to nitrate accumulation. The second outbreak occurred in pastures cultivated in the border of a dam, that had been submerged for long time accumulating large amounts of organic matter in the soil. Other probably risk factors for nitrate accumulation included the use of chemical fertilizers and herbicides and burning of the vegetation. In the first outbreak, four calves out of a total of 42 cattle died, and in the second outbreak 49 out of 243 cattle, including adults, yearlings, and a 2-day-old calf died. The clinical signs included dyspnea, cyanosis, ataxia, and falls, leading to death. The presence of nitrates was detected in both outbreaks using the diphenylamine test. Quantitative tests were performed in the second outbreak using a portable nitrate meter, and high nitrate concentrations were found. The characteristic macroscopic findings and absence of microscopic lesions and response to treatment with methylene blue were key to the diagnosis of poisoning by nitrates and nitrites. We conclude that poisoning by nitrates and nitrites in ruminants in the semiarid region of Northeastern Brazil is frequent due to the cultivation of grasses in the border of dams that had been covered by water for long periods or in areas irrigated by wastewater and/or sewage. In addition, the use of a portable measuring device is an effective alternative for the quantification of nitrates in pastures.(AU)

Relatamos dois surtos de intoxicação por nitrato e nitrito na Paraíba, Nordeste do Brasil. O primeiro por Pennisetum purpureum (capim-elefante), e o segundo por P. purpureum e Brachiaria spp. (capim braquiária); ambos ocorreram durante uma estiagem prolongada. No primeiro surto, a irrigação das pastagens com água poluída e esgoto contribuiu para o acúmulo de nitrato. O segundo surto ocorreu em pastagens cultivadas na borda de uma barragem, que há muito tempo ficavam submersas, acumulando grande quantidade de matéria orgânica no solo. Outros prováveis fatores de risco para o acúmulo de nitrato incluíram o uso de fertilizantes químicos e herbicidas e a queima da vegetação. No primeiro surto, quatro bezerros de um total de 42 bovinos morreram, e no segundo surto 49 de 243 bovinos, incluindo adultos, jovens de um ano e um bezerro de 2 dias de idade morreram. Os sinais clínicos incluíram dispneia, cianose, ataxia e quedas, levando à morte. A presença de nitratos foi detectada em ambos os surtos pelo teste de difenilamina. Testes quantitativos foram realizados no segundo surto usando um medidor portátil de nitrato, e altas concentrações de nitrato foram encontradas. Os achados macroscópicos característicos e a ausência de lesões microscópicas e a resposta ao tratamento com azul de metileno foram fundamentais para o diagnóstico de intoxicação por nitratos e nitritos. Concluímos que a intoxicação por nitratos e nitritos em ruminantes na região semiárida do Nordeste do Brasil é frequente devido ao cultivo de gramíneas nas bordas de barragens que estiveram cobertas por água por longos períodos ou em áreas irrigadas por água poluída e/ou esgoto. Além disso, o uso de medidor portátil é uma alternativa eficaz para a quantificação de nitratos em pastagens.(AU)

Clinical and toxicological findings in nitrate and nitrite poisoning in cattle in Northeastern Brazil / Achados clínicos e toxicológicos na intoxicação por nitrato e nitrito em bovinos no Nordeste do Brasil

We report two outbreaks of nitrate and nitrite poisoning in Paraíba, Northeast Brazil. The first, due to Pennisetum purpureum (elephant grass), and the second, due to P. purpureum and Brachiaria spp. (brachiaria grass), both occurred during a prolonged drought. In the first outbreak, the irrigation of the pastures with wastewater and sewage contributed to nitrate accumulation. The second outbreak occurred in pastures cultivated in the border of a dam, that had been submerged for long time accumulating large amounts of organic matter in the soil. Other probably risk factors for nitrate accumulation included the use of chemical fertilizers and herbicides and burning of the vegetation. In the first outbreak, four calves out of a total of 42 cattle died, and in the second outbreak 49 out of 243 cattle, including adults, yearlings, and a 2-day-old calf died. The clinical signs included dyspnea, cyanosis, ataxia, and falls, leading to death. The presence of nitrates was detected in both outbreaks using the diphenylamine test. Quantitative tests were performed in the second outbreak using a portable nitrate meter, and high nitrate concentrations were found. The characteristic macroscopic findings and absence of microscopic lesions and response to treatment with methylene blue were key to the diagnosis of poisoning by nitrates and nitrites. We conclude that poisoning by nitrates and nitrites in ruminants in the semiarid region of Northeastern Brazil is frequent due to the cultivation of grasses in the border of dams that had been covered by water for long periods or in areas irrigated by wastewater and/or sewage. In addition, the use of a portable measuring device is an effective alternative for the quantification of nitrates in pastures.

Relatamos dois surtos de intoxicação por nitrato e nitrito na Paraíba, Nordeste do Brasil. O primeiro por Pennisetum purpureum (capim-elefante), e o segundo por P. purpureum e Brachiaria spp. (capim braquiária); ambos ocorreram durante uma estiagem prolongada. No primeiro surto, a irrigação das pastagens com água poluída e esgoto contribuiu para o acúmulo de nitrato. O segundo surto ocorreu em pastagens cultivadas na borda de uma barragem, que há muito tempo ficavam submersas, acumulando grande quantidade de matéria orgânica no solo. Outros prováveis fatores de risco para o acúmulo de nitrato incluíram o uso de fertilizantes químicos e herbicidas e a queima da vegetação. No primeiro surto, quatro bezerros de um total de 42 bovinos morreram, e no segundo surto 49 de 243 bovinos, incluindo adultos, jovens de um ano e um bezerro de 2 dias de idade morreram. Os sinais clínicos incluíram dispneia, cianose, ataxia e quedas, levando à morte. A presença de nitratos foi detectada em ambos os surtos pelo teste de difenilamina. Testes quantitativos foram realizados no segundo surto usando um medidor portátil de nitrato, e altas concentrações de nitrato foram encontradas. Os achados macroscópicos característicos e a ausência de lesões microscópicas e a resposta ao tratamento com azul de metileno foram fundamentais para o diagnóstico de intoxicação por nitratos e nitritos. Concluímos que a intoxicação por nitratos e nitritos em ruminantes na região semiárida do Nordeste do Brasil é frequente devido ao cultivo de gramíneas nas bordas de barragens que estiveram cobertas por água por longos períodos ou em áreas irrigadas por água poluída e/ou esgoto. Além disso, o uso de medidor portátil é uma alternativa eficaz para a quantificação de nitratos em pastagens.

Localización intraoperatoria de las recurrencias en cáncer de tiroides mediante la inyección de azul de metileno guiada por ecografía / Intraoperative localization of recurrences in thyroid cancer by ultrasound-guided injection of methylene blue

Introducción. La cirugía para extirpación de metástasis en un cuello previamente intervenido afronta un reto para lograr una resección exitosa. El presente estudio pretende demostrar la utilidad de la técnica de inyección de azul de metileno, guiada por ecografía, para la localización intraoperatoria de lesiones recurrentes en cáncer de tiroides, para facilitar su resección. Métodos. Se realizó un estudio observacional, descriptivo y retrospectivo, en pacientes reintervenidos por recurrencia de carcinoma diferenciado de tiroides, durante un periodo de dos años y medio. Se utilizó la inyección intratumoral de azul de metileno guiada por ecografía para su identificación intraoperatoria de recurrencia. Se hizo análisis de variables demográficas y clínicas. Resultados. Este estudio incluyó 10 procedimientos en 9 pacientes, 77,8 % mujeres, con una media de edad de 54 años. Todos tenían un nivel de tiroglobulina detectable y elevado antes de la intervención; posteriormente, el 89 %presentó un descenso y el 33 % una adecuada respuesta bioquímica. La técnica agregó 10 minutos al tiempo quirúrgico. En el 100 % se identificaron de manera intraoperatoria los ganglios marcados; el promedio de ganglios resecados fue de 12, de los cuales, 6 fueron positivos, todos con carcinoma papilar de tiroides. Esta técnica se consideró de gran utilidad y de bajo costo en todos los casos. Discusión. Esta técnica se muestra como una estrategia efectiva para la identificación intraoperatoria de las recurrencias corregionales en carcinoma de tiroides, permitiendo una disección ganglionar exitosa, disminuyendo complicaciones, tiempo quirúrgico y, especialmente, costos frente a otras intervenciones

Introduction. The approach of a previously operated neck for metastasis resection faces a challenge to achieve a successful resection. The present study aims to demonstrate the usefulness of the ultrasound-guided injection of methylene blue technique for the intraoperative localization of recurrent lesions in thyroid cancer to facilitate their resection. Methods. An observational, descriptive and retrospective study was conducted in patients reoperated for recurrences of differentiated thyroid carcinoma over a period of two and a half years, using ultrasound-guided intratumoral injection of methylene blue for its intraoperative identification. An analysis of demographic and clinical variables was carried out and its advantages over other methods were identified. Results. This study included 10 procedures in nine patients, 77.8% women and 22.2% men, with a mean age of 54 years. All had a detectable and elevated thyroglobulin level before the intervention, 89% had a decrease in its level and 33% had an adequate biochemical response. The technique added 10 minutes to the surgical time. All marked lymph nodes were identified intraoperatively. The average number of lymph nodes resected was 12, of which six were positive, all with papillary thyroid carcinoma. It was considered of great utility and low cost in all cases. Discussion. This technique shows to be an effective strategy for the intraoperative identification of locoregional recurrences in thyroid carcinoma, allowing a successful lymph node dissection, reducing complications, surgical time and especially costs compared to other interventions

The routine use of the methylene blue test in sleeve gastrectomy: why not? / Uso rotineiro do teste do azul de metileno na gastrectomia vertical: por que não?

ABSTRACT Background: Although considered a safe procedure, sleeve gastrectomy (SG) has a non-negligible risk of major postoperative complications related to it, with special attention to gastric leaks. Aim: Evaluate the clinical value of the methylene blue test (MBT) in predicting the occurrence of post-SG leaks. Methods: Retrospective study that included 1136 patients who underwent SG with intraoperative MBT between 2012 and 2016. Sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV) and negative predicted value (NPV) were calculated to determine the clinical correlation between the MBT and the occurrence of postoperative leaks. Staple line oversewing was performed in all patients who presented positive MBT. Results: Laparoscopic SG was performed in 97.0% of cases; open in 2.3%, and robotic in 0.7%. MBT was positive in 19 cases (1.67%). One positive MBT occurred during an open SG and the other 18 at laparoscopy. Moreover, there were nine cases (0.8%) of postoperative leaks, among which, only two presented positive MBT. MBT diagnostic value was evaluated through the calculation of sensitivity (22.0%), specificity (98.0%), PPV (11.0%) and NPV (99.0%). There were no cases of allergic reaction or any other side effect with the use of the methylene blue solution. Conclusion: MBT showed high specificity and negative predictive value, thus presenting an important value to rule out the occurrence of postoperative leaks.

RESUMO Racional: Embora considerada procedimento seguro, a gastrectomia vertical (GV) apresenta risco não desprezível de complicações pós-operatórias importantes relacionadas a ela, com atenção especial para fístulas gástricas Objetivo: Avaliar a aplicabilidade clínica do teste do azul de metileno (TAM) na predição da ocorrência de fístulas após a GV. Método: Estudo retrospectivo que incluiu 1136 pacientes operados entre 2012 e 2016 com aplicação do TAM intraoperatório. Sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo (VPP) e valor preditivo negativo (VPN) foram calculados na tentativa de determinar a correlação clínica entre os resultados do TAM e a ocorrência de fístulas pós-operatórias. Sobressutura da linha de grampos foi realizada em todos os pacientes que apresentaram TAM positivo. Resultados: GV laparoscópica foi realizada em 97,0% dos casos; por laparotomia em 2,3% e roboticamente em 0,7%. TAM foi positivo em 19 casos (1,67%). Um dos casos positivos ocorreu na laparotomia e os outros 18 na laparoscopia. Ainda, houve nove casos (0,8%) de fístulas pós-operatórias, dentre os quais, apenas dois apresentaram TAM positivo. O valor diagnóstico do TAM foi avaliado através dos cálculos de sensibilidade (22,0%), especificidade (98,0%), VPP (11,0%) e VPN (99,0%). Não houve casos de reação alérgica ou qualquer outro efeito colateral advindo do uso da solução de azul de metileno. Conclusão: TAM mostrou alta especificidade e VPN, apresentando importância em descartar a ocorrência de fístulas pós-operatórias.

Antimicrobial photodynamic inactivation mediated by methylene blue: Analysis of inactivation kinetics and biochemical mechanisms / Inativação fotodinâmica antimicrobiana mediada por azul de metileno: Análises de cinética de inativação e mecanismos bioquímicos

The widespread use of antimicrobial chemotherapy in medicine and livestock production imposed an evolutive selection of drug-resistant strains worldwide. As a result, the effectiveness of our current antimicrobial armamentarium is constantly being reduced to alarming levels. Therefore, novel antimicrobial therapeutic strategies are urgently needed. Antimicrobial photodynamic therapy (APDT) comes to this scenario as a powerful tool to counteract the emergence of microbial drug-resistance. Its mechanisms of action are based on simultaneous oxidative damage of multiple targets and, therefore, it is much less likely to allow any type of microbial resistance. Therefore, the objectives of this study were focused into establishing 1) a mathematical tool to allow precise analysis of microbial photoinactivation; 2) a broad analysis of APDT effectiveness against global priority drug-resistant pathogens; 3) inhibition of ßlactamase enzymes; and 4) how the biochemical mechanisms of APDT avoid emergence of resistance. The main results obtained through the investigation led by this thesis were divided into 4 scientific articles regarding each of the above-mentioned objectives. In summary, we discovered that 1) a power-law function can precisely fit all microbial inactivation kinetics data and provide insightful information of tolerance factors and lethal doses; 2) there is no correlation between drug-resistance and APDT sensitivity, i.e., extensively drug resistant microorganisms are killed in the same kinetics as drug-sensitive controls; 3) ß-lactamases are very sensitive to photodynamic inhibition; 4) biochemical mechanisms of APDT promote oxidative damages to external cell membranes, DNA and proteins whereas the main cause of microbial death seems to be directly associated with protein degradation. Thus, we conclude that APDT is effective against a broad-spectrum of pathogens and has minimum chances of promoting resistance mechanisms

O amplo uso da quimioterapia antimicrobiana impôs uma seleção evolutiva de cepas resistentes a medicamentos. Como resultado, a eficácia dos fármacos antimicrobianos tem sido reduzida a níveis alarmantes. Portanto, novas estratégias terapêuticas antimicrobianas são urgentemente necessárias. A terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDA) entra neste cenário como uma ferramenta poderosa para combater a resistência microbiana. Seus mecanismos de ação são baseados no dano oxidativo sobre múltiplos alvos e, portanto, é muito menos provável que permita o surgimento de qualquer tipo de resistência. Os objetivos deste estudo foram focados ao estabelecimento de 1) modelo matemático para análise precisa da fotoinativação microbiana; 2) ampla análise da eficácia da TFDA contra patógenos resistentes a fármacos antimicrobianos de prioridade global; 3) inibição de ß-lactamases por TFDA; e 4) como os mecanismos bioquímicos da TFDA evitam o surgimento de resistência. Os principais resultados obtidos através da investigação conduzida por esta tese foram divididos em 4 artigos científicos. Em resumo, descobrimos que 1) uma função de lei de potência pode ajustar com precisão todos os dados de cinética de inativação microbiana e fornecer informações detalhadas sobre fatores de tolerância e doses letais; 2) não há correlação entre resistência à quimioterapia antimicrobiana e sensibilidade à TFDA, isto é, cepas extensivamente resistentes aos antimicrobianos são inativadas sob a mesma cinética que controles sensíveis aos antimicrobianos; 3) ß-lactamases são altamente sensíveis à inibição fotodinâmica; 4) os mecanismos bioquímicos da TFDA promovem danos oxidativos às membranas celulares e DNA, porém, a principal causa de morte microbiana é diretamente associada à degradação das proteínas. Assim, concluímos que a TFDA é eficaz contra um amplo espectro de patógenos e tem chances mínimas de promover mecanismos de resistência

Associação da quitosana à terapia fotodinâmica para controle de Candida albicans: estudo em culturas planctônicas, biofilmes e células persistentes / Association of chitosan and photodynamic therapy to control Candida albicans: study in planktonic cultures, biofilms and persister cells

A terapia fotodinâmica (TFD) vem se mostrando como um método eficaz no controle de micro-organismos patogênicos, sendo investigada para o tratamento de diversas doenças infecciosas, como a candidose bucal. Recentemente, alguns agentes potencializadores dessa terapia têm sido estudados, incluindo a Quitosana (QT), um polímero natural extraído do exoesqueleto de crustáceos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito potencializador da QT na TFD mediada pelo fotossensibilizador Azul de Metileno (AM) sobre cepas de Candida albicans, investigando sua ação em culturas planctônicas, biofilmes e células persistentes ao fluconazol. Além disso, foi avaliado a capacidade da QT em interferir na absorção do AM pelas células de Candida. Foram utilizadas duas cepas de C. albicans, sendo uma padrão (ATCC 18804) e uma clínica isolada de candidose orofaríngea (70). Para os ensaios em culturas planctônicas, as cepas de C. albicans foram cultivadas em caldo Yeast Nitrogen Base (YNB) por 24 horas. Os biofilmes foram formados por 48 horas no fundo das placas de 96 poços. Para indução de células persistentes, C. albicans foi cultivada com altas concentrações de fluconazol por 48 horas. A seguir, foram realizados os tratamentos com QT a 5 mg/mL (pH de 6,5), AM nas concentrações de 300 ou 600 µM, e irradiação com LED (660 nm) na densidade de energia de 30 J/cm2. Foram incluídos oito grupos experimentais: TFD com AM e QT na presença de Luz (AM+QT+L+), AM e QT sem Luz (AM+QT+L-), QT e Luz (QT+L+), QT sem Luz (QT+L-), TFD com AM e Luz (AM+L+), AM sem Luz (AM+L-), Solução Fisiológica com Luz (F-L+) e apenas Solução Fisiológica (F-L-). Após os tratamentos, foi realizada contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Para determinar a absorção do fotossensibilizador pelas células de C. albicans, as células foram lisadas e centrifugadas para leitura da densidade óptica. Os dados foram analisados por ANOVA e teste de Tukey (p<0,05%). Na TFD em culturas planctônicas, o AM (300 µm) reduziu as células de Candida em 1,6 log (UFC/mL), enquanto que a associação AM+QT levou à redução de 4,7 log. Na TFD em biofilmes, ocorreu redução microbiana de 2,9 log para o tratamento com AM (600 µm) e de 5,3 log para AM+QT. Em relação às células persistentes, a redução encontrada foi de 0,8 log para AM e 1,5 log para AM+QT. No teste de absorção, a penetração do AM nas células de Candida (DO 0,02) foi aumentada na presença da QT (DO 0,39). Concluiu-se que a QT potencializou o efeito antimicrobiano da TFD em culturas planctônicas, biofilmes e células persistentes de C. albicans, provavelmente por facilitar a penetração do AM nas células fúngicas.

Photodynamic therapy (PDT) has been shown to be an effective method to control pathogenic microorganisms, being investigated for the treatment of several infectious diseases, such as oral candidiasis. Recently, some agents that enhance this therapy have been studied, including Chitosan (CS), a natural polymer extracted from the exoskeleton of crustaceans. The aim of this study was to evaluate the potentiating effect of CS on Methylene Blue (MB) photosensitizer-mediated PDT on Candida albicans strains, investigating its action on planktonic cultures, biofilms and persister cells to fluconazole. In addition, the ability of CS to interfere with MB absorption by Candida cells was evaluated. Two strains of C. albicans were used, one standard (ATCC 18804) and one isolated clinical of oropharyngeal candidosis (70). For assays in planktonic cultures, C. albicans strains were cultivated in Yeast Nitrogen Base broth (YNB) for 24 hours. Biofilms were formed for 48 hours at the bottom of 96-well plates. For the induction of persister cells, C. albicans was cultivated with high concentrations of fluconazole for 48 hours. Next, treatments were performed with CS at 5 mg/mL (pH 6.5), MB at concentrations of 300 or 600 µM, and irradiation with LED (660 nm) at an energy density of 30 J/cm2. eight experimental groups were included: PDT with MB and CS in the presence of Light (MB+CS+L+), MB and CS without Light (MB+CS+L-), CS and Light (CS+L+), CS without Light (CS +L-), PDT with MB and Light (MB+L+), MB without Light (MB+L-), Physiological Solution with Light (F-L+) and Physiological Solution only (FL-). After the treatments, colony forming units (CFU/mL) were counted. To determine the absorption of the photosensitizer by C. albicans cells, the cells were lysed and centrifuged for optical density reading. Data were analyzed by ANOVA and Tukey test (p<0.05%). In PDT in planktonic cultures, MB (300 µm) reduced Candida cells by 1.6 log (CFU/mL), while the MB+CS association led to a 4.7 log reduction. In PDT in biofilms, there was a microbial reduction of 2.9 log for the treatment with MB (600 µm) and of 5.3 log for MB+CS. Regarding persister cells, the reduction found was 0.8 log for MB and 1.5 log for MB+CS. In the absorption test, the penetration of MB into Candida cells (OD 0.02) was increased in the presence of CS (OD 0.39). It was concluded that CS potentiated the antimicrobial effect of PDT in planktonic cultures, biofilms and persister cells of C. albicans, probably by facilitating the penetration of MB into fungal cells .

Metahemoglobinemia grave de origen desconocido: respuesta al tratamiento con ácido ascórbico / Severe methemoglobinemia of unknown origin: response to treatment with ascorbic acid

La metahemoglobina es una forma oxidada de la hemoglobinaque en un valor mayor a 1% en adultos y a 2% en lactantes, que genera anemia funcional e hipoxia tisular. Puede ser adquirida o congénita. La forma adquirida es más frecuente y suele ocurrir cuando se sobrepasa los mecanismos reductores de protección. El azul de metileno es el antídoto de primera elección. En caso de no contar con este,debe considerarse el uso de ácido ascórbico. La instauración de un tratamiento rápido y eficaz disminuye los efectos potencialmente fatales. Reportamos el caso de un paciente de 2 años que ingresa a la guardia pediátrica con cianosis generalizada refractaria a la oxigenoterapia

Methemoglobin is an oxidized form of hemoglobin that in a value greater than 1% in adults and 2% in infants generates functional anemia and tissue hypoxia.It can be acquired or congenital. The acquired form is more frequent and usually occurs when the protective reducing mechanisms are exceeded. Methylene blue is the first-line antidote. If such is not available, the use of ascorbic acid should be considered. Choosing a fast and effective treatment decreases the potentially fatal effects. We report the case of a 2-year-old patient who enters the pediatric ward with generalized cyanosis refractory to oxygen therapy

The ineffectiveness of antimicrobial photodynamic therapy in the absence of preincubation of the microorganisms in the photosensitizer / A ineficácia da terapia fotodinâmica antimicrobiana na ausência da pré-incubação dos microrganismos no fotossensibilizante / La ineficacia de la terapia fotodinámica antimicrobiana en ausencia de preincubación de los microorganismos en el fotosensibilizante

Abstract Introduction: Considering its potential as an alternative therapy to combat multiresistant bacteria, photodynamic therapy has been improved and better studied in recent years, and determining its optimized application patterns is important. Objective: This study aimed to evaluate the action of antimicrobial photodynamic therapy mediated by methylene blue in the absence of preincubation of infectious agents in the photosensitizer. Method: Standard strains of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa were used, which was or was not submitted to two methylene blue concentrations (0.1 μg/mL and 500 mg/mL) applied alone or in combination with a variety of red laser emission parameters (660 nm); in both cases, the streak was performed immediately after mixing between the photosensitizer and the solution containing the bacteria. Results: In the dishes with only methylene blue application neither antibacterial was produced, nor inhibition at the application points of the photodynamic therapy in the case of the bacterium Pseudomonas aeruginosa. However, in the cultures of Staphylococcus aureus in which laser emission was associated with the concentration of 500 mg/mL of the photosensitizer, inhibition was present at the laser application points. Conclusion: The time of exposure to the photosensitizer prior to the application of phototherapy seems to be an essential factor for the optimized action of photodynamic therapy, especially in the case of Gram-negative bacteria.

Resumo Introdução: Considerando seu potencial como forma de combate alternativo a bactérias multirresistentes, a terapia fotodinâmica vem sendo aperfeiçoada e mais bem estudada nos últimos anos, sendo importante determinar seus padrões otimizados de aplicação. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar a ação da terapia fotodinâmica antimicrobiana mediada pelo azul de metileno na ausência de pré-incubação dos agentes infecciosos no fotossenbilizante. Método: Foram usadas cepas padrão de Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa, as quais foram submetidas ou não à 2 concentrações de azul de metileno (0,1 µg/mL and 500 mg/mL) aplicadas isoladamente ou em associação com variados parâmetros de emissão de laser vermelho (660 nm); em ambos os casos, a semeadura foi realizada imediatamente após a mistura entre o fotossensibilizante e a solução contendo as bactérias. Resultados: Nas placas em que houve somente aplicação de azul de metileno não houve qualquer efeito antibacteriano, assim como não houve inibição nos pontos de aplicação da terapia fotodinâmica no caso da bactéria Pseudomonas aeruginosa. No entanto, nas culturas de Staphylococcus aureus em que houve a emissão laser associada à concentração de 500 mg/ml do fotossensibilizante, houve presença de inibição nos pontos de aplicação do laser. Conclusão: Conclui-se que há indícios de que o tempo de exposição ao fotossensibilizante prévio à aplicação da fototerapia é um fator essencial para a otimização da terapia fotodinâmica, especialmente no caso de bactérias Gram-negativas.

Resumen Introducción: Considerando su potencial como forma de combate alternativo a bacterias multirresistentes, la terapia fotodinámica se ha perfeccionada y mejor estudiada en los últimos años, siendo importante determinar sus patrones optimizados de aplicación. Objetivo: El objetivo de este estudio fue evaluar la acción de la terapia fotodinámica antimicrobiana mediada por el azul de metileno en la ausencia de preincubación de los agentes infecciosos en el fotosenbilizante. Método: Se utilizaron cepas estándares de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa, las cuales fueron sometidas o no a las 2 concentraciones de azul de metileno (0,1 μg/mL y 500 mg/mL) aplicadas aisladamente o en asociación con variados parámetros de emisión de láser rojo (660 nm); en ambos casos, la siembra fue realizada inmediatamente después de la mezcla entre el fotosensibilizante y la solución conteniendo las bacterias. Resultados: En las placas con aplicación solamente de azul de metileno no hubo ningún efecto antibacteriano, así como no hubo inhibición en los puntos de aplicación de la terapia fotodinámica en el caso de la bacteria Pseudomonas aeruginosa. Sin embargo, en los cultivos de Staphylococcus aureus en los que se produjo la emisión láser asociada a la concentración de 500 mg/mL del fotosensibilizante, hubo presencia de inhibición en los puntos de aplicación del láser. Conclusión: Se concluye que hay indicios de que el tiempo de exposición al fotosensibilizante previo a la aplicación de la fototerapia es un factor esencial para la optimización de la terapia fotodinámica, especialmente en el caso de bacterias Gram-negativas.

Validation of a new method for estimating low platelet counts: G&S method / Validação de um novo método para estimação de contagens plaquetárias baixas: método G&S

ABSTRACT Introduction: Automated hematology analyzers are able to produce low platelet counts with great precision and accuracy. However, these analyzers may produce erroneous counts due to the presence of interferences. Therefore, additional methodologies are required to confirm platelet counts, such as blood smear and a direct count, using the Neubauer chamber. Objective: To validate the reliability estimate produced by the G&S method. Material and method: One hundred and fifty platelet counts were analyzed in the hematology and emergency laboratories of the Hospital Nacional Docente Madre-Niño San Bartolomé, in Lima, Peru, by four methodologies: one optical platelet count (PLTO), one indirect blood smear count (Indirect), and two direct counts (Direct and G&S). Descriptive and inferential statistics were used to compare the groups. Results: A significant difference was observed in the distribution of the four methodologies and, after applying the post-hoc analysis, a similarity between the PLTO and G&S methods was found. Also, the Direct, G&S and Indirect methods showed a positive correlation with the PLTO method. The Bland-Altman test demonstrated that the G&S method presented a high agreement with the PLTO method. Conclusion: The G&S method is inexpensive, easy to perform, and has demonstrated statistical reliability concerning the automated methodology, and is useful for confirming low platelet counts after a suspected error by the automated equipment or when this device is not available for use.

RESUMEN Introducción: Los analizadores automáticos hematológicos son capaces de realizar bajos recuentos de plaquetas con precisión y exactitud. Sin embargo, eses analizadores pueden producir recuentos erróneos debido a la presencia de interferencias. Así, métodos adicionales son necesarios para confirmar los recuentos de plaquetas, como el frotis de sangre y un recuento directo en cámara de Neubauer. Objetivo: Validar la confiabilidad de la estimación del método G&S. Material y método: Se analizaron ciento cincuenta recuentos de plaquetas en los laboratorios de hematología y emergencias del Hospital Nacional Docente Madre-Niño San Bartolomé, en Lima, Perú, por cuatro métodos: un recuento óptico de plaquetas (PLTO), un recuento indirecto por frotis de sangre (Indirecto) y dos recuentos directos (Directo y G&S). Se utilizaron estadísticas descriptivas e inferenciales para comparar los grupos. Resultados: Se observó diferencia significativa en la distribución de los cuatro métodos y, luego de la aplicación del análisis post-hoc, se encontró similitud entre los métodos PLTO y G&S. Además, los métodos Directo, G&S e Indirecto mostraron correlación positiva con el método PLTO. La prueba de Bland-Altman demostró que el método G&S presentó alta concordancia con el método PLTO. Conclusión: El método G&S es económico, fácil de llevar a cabo y demostró confiabilidad estadística en relación con el método automatizado, siendo útil para confirmar bajos recuentos de plaquetas después de una sospecha de error por el equipo automático o cuando el laboratorio no cuente con éste.

RESUMO Introdução: Os analisadores automatizados hematológicos são capazes de realizar baixas contagens de plaquetas com precisão e exatidão. No entanto, esses analisadores podem produzir contagens erradas devido à presença de interferências. Dessa forma, métodos adicionais são necessários para confirmar as contagens de plaquetas, como esfregaço de sangue e uma contagem direta, utilizando a câmara de Neubauer. Objetivo: Validar a confiabilidade gerada pela estimativa do método G&S. Material e método: Cento e cinquenta contagens de plaquetas foram analisadas nos laboratórios de hematologia e emergência do Hospital Nacional Docente Madre-Niño San Bartolomé em Lima, Peru, por quatro metodologias: uma contagem óptica de plaquetas (PLTO), uma contagem indireta por esfregaço de sangue (Indireto) e duas contagens diretas (Direto e G&S). Estatísticas descritivas e inferenciais foram utilizadas para comparar os grupos. Resultados: Observou-se diferença significativa na distribuição das quatro metodologias e, após a aplicação da análise post-hoc, obteve-se semelhança entre os métodos PLTO e G&S. Além disso, os métodos Direto, G&S e Indireto mostraram correlação positiva com o método PLTO. O teste de Bland-Altman demonstrou que o método G&S apresentou alta concordância com o método PLTO. Conclusão: O método G&S é barato, fácil de executar e demonstrou confiabilidade estatística em relação à metodologia automatizada, sendo útil para confirmar baixas contagens de plaquetas após uma suspeita de erro pelo equipamento automatizado ou quando não se tem esse aparelho disponível para uso.

Microfiltración apical entre dos cementos de obturación: biocerámico y resinoso en premolares unirradiculares preparadas con protaper, y obturadas con condensación lateral / Apical microfiltration between two filling cements: bioceramic and resinous in unirradicular premolars prepared with protaper and sealed with lateral condensation

Resumen Objetivo: Comparar in vitro la microfiltración apical en premolares unirradiculares obturados con cemento a base de resina epóxica y cemento biocerámico. Método: 40 piezas dentales unirradiculares fueron seleccionadas y divididas en dos grupos para ser obturadas esperando el tiempo de fraguado de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El grupo A se obturó con cemento biocerámico Endosequence y, el grupo B, con cemento a base de resina epóxica AH-Plus: posteriormente los dos grupos fueron sellados con barniz de uñas hasta 3mm de la parte apical, luego se colocaron las muestras en la incubadora a 37ºC. Ambos fueron sometidos a 750 ciclos de termociclado, para reproducir el ambiente parecido a la cavidad oral. Para análisis de microfiltración se utilizó el método de difusión del colorante, se sumergieron en azul de metileno al 2 % por 6 días, posteriormente los especímenes fueron sometidos en una bomba de vacío. Los dientes fueron cortados longitudinalmente para ser evaluadas mediante el estereomicroscopio. El análisis estadístico fue hecho mediante T-Student y Chi-Cuadrado. Resultados: El grupo A corresponde a Endosequence obtuvo una medida de 0,55mm y el grupo B corresponde a AH-Plus 1,20mm con un estimado de significancia de p=0,013. Conclusión: El análisis de ambos cementos de obturación demostró que Endosequence posee menor microfiltración apical que AH-Plus.

Abstract Aim: To compare in vitro by the stereomiscroscope the lesser apical microfiltration in uniradicular premolars, between the cement based on Epoxy Resin and Bioceramic cement. Method: The study was performed on 40 uniradicular dental pieces divided into two groups, the samples were prepared using the protaper system and the obturation was performed using the lateral condensation technique, the first group was sealed withEndosequence bioceramic cement and the second group with Cement based on AH-Plus epoxy resin, then sealed with nail varnish up to 3mm from the apical part, then the samples were placed in the incubator at 37ºC, waiting for the set time corresponding to each group according to the manufacturer's instructions . The two groups of the present study were submitted to 750 cycles of thermocycling, to provide an environment similar to the oral cavity, then longitudinal cuts were made to the samples. The microfiltration was evaluated using the dye diffusion method, immersed in 2% methylene blue for 6 days, then the specimens were subjected to a vacuum pump. The teeth were cut longitudinally to be evaluated by the stereomicroscope. The statistical analysis was through T-Student and Chi-Square. Results: Group A corresponds to Endosequence obtained a mean of 0,55mm and Group B corresponds to AH-Plus 1,20mm with an estimated significance of p = 0,013. Conclusion: Both obturation cements have significant differences, therefore Endosequence has less apical microfiltration than AHPlus.

Empleo preoperatorio de azul de metileno pre-implante de dispositivos de asistencia ventricular izquierda / Preoperative utilization of methylene blue previously to implant of left ventricular assist device

Introducción. El objetivo del presente estudio fue analizar el empleo preoperatorio de azul de metileno (AM) como prevención del desarrollo de síndrome vasopléjico en pacientes bajo implante de dispositivos de asistencia ventricular izquierda (DAVI), considerando: porcentaje de pacientes que desarrollan vasoplejía, requerimiento de vasopresores, morbimortalidad postoperatoria y seguridad del empleo del fármaco. Métodos. Fueron incluidos pacientes sometidos al implante de DAVI de flujo continuo (HeartMate II o HeartWare) entre enero de 2009 y enero de 2014. Los pacientes fueron aleatorizados a AM en dosis de 1,5 mg/Kg, previamente a la circulación extracorpórea, seguido por una infusión de 0,5 mg/Kg/hora del mismo. Se definió síndrome vasopléjico en base a hipotensión arterial con presión capilar pulmonar baja, índice cardíaco normal o elevado, resistencias sistémicas descendidas y requerimiento vasopresor. Un valor de P<0,05 se consideró significativo. Resultados. En el lapso del estudio fueron incluidos 64 pacientes, 33 de los cuales recibieron AM (dosis promedio 3,5 mg/kg) y 31 pacientes representaron el grupo control. Veinte (31,1%) pacientes desarrollaron vasoplejía, 6 (18,2%) pacientes en el grupo AM frente a 14 (45,2%) del grupo control (P=0,01; OR 0,27 con IC de 0,08-0,84). El requerimiento de vasopresores resulto, asimismo, inferior en los pretratados, 23 (69,7%) pacientes versus 30 (96,8%) pacientes (P=0,004; OR 0,07; IC 0,003-0,522). La mortalidad postoperatoria resulto de 13 (20,3%) pacientes, 4 (12,1%) de ellos en el grupo AM frente a 9 (29%) del grupo control (P=0,06; OR 0,35; IC 0,106-1,117). En todos los pacientes tratados con AM se evidenció el cambio de coloración de la orina. Cinco (7,8%) pacientes presentaron hipertensión arterial, requiriendo vasodilatadores endovenosos, 3 (9,1%) pacientes en el grupo AM frente a 2 (6,4%) en el grupo control (valor de P=0,3). Conclusiones. El empleo preoperatorio de AM se asoció con la reducción del desarrollo de síndrome vasopléjico, así como del requerimiento vasopresor. Se observó una reducción de complicaciones postoperatorias y una tendencia a menor mortalidad. Un número mayor de pacientes requiere ser valorado para comprobar la utilidad de esta estrategia

Introduction. The objective of this study was to analyze preoperative utilization of methylene blue (MB) for preventing development of vasoplegic syndrome in patients underwent left ventricle assist device (LVAD) implant considering: percentage of patients developing vasoplegia, vasopresor requirement, perioperative morbidity and mortality and safety associated with MB s use. Methods. There were admitted patients underwent an implant of a LVAD of continuous flow (HeartMate II or HeartWare) from January 2009 to January 2014. Patients were randomized to MB, 1.5 mg/Kg one hour before extracorporeal circulation followed for 0.5 mg/kg/hour or placebo (control group). It was defined vasoplegia by: arterial hypotension, low capillary pulmonary pressure, normal or elevated cardiac index, descended systemic vascular resistances and vasopresor requirement. A P<0.05 was considered significant. Results. There were included 64 patients, 33 of them were randomized to MB (average dose 3.5 mg/Kg) and 31 patients represented control group. Twenty (31.1%) patients developed vasoplegia, 6 (18.2%) patients from MB s group versus 14 (45.2%) patients from control group (P=0.01, OR 0.27, IC de 0.08-0.84). Vasopressor requirement was lower in those receiving MB 23 (69.7%) patients versus 30 (96.8%) patients (P=0.004, OR 0.07, IC 0.003- 0.522). Postoperative mortality was 13 (20.3%) patients, 4 (12.1%) of them receiving MB versus 9 (29%) patients from control group (P=0.06, OR 0.35 IC 0.106-1.117). In all treated patients it was evident a change in urine s color and also five (7.8%) patients developed arterial hypertension, requiring vasodilators 3 (9.1%) patients from MB s group versus 2 (6.4%) from control (valor de P=0.3). Conclusions. The preoperative use of MB was associated with reduction of vasoplegia and a lower vasopresor requirements. It was also observed reduction of postoperative complications and a trend to reduced mortality. A superior number of patients needs to be evaluated for proving the value of this strategy

Introdução. O objetivo deste estudo foi analisar a utilização pré-operatória do azul de metileno (AM) para prevenir o desenvolvimento da síndrome vasoplégica em pacientes submetidos a implante de dispositivo de assistência ventricular esquerda (DAVE), considerando: porcentagem de pacientes em desenvolvimento de vasoplegia, necessidade de vasopresor, morbidade e mortalidade e segurança perioperatórias associado ao uso do AM. Métodos. Foram admitidos pacientes submetidos a um implante de uma DAVE de fluxo contínuo (HeartMate II ou HeartWare) de janeiro de 2009 a janeiro de 2014. Os pacientes foram randomizados para AM, 1,5 mg/kg uma hora antes da circulação extracorpórea, seguidos por 0,5 mg/kg/hora ou placebo (grupo controle). Foi definida vasoplegia por: hipotensão arterial, pressão pulmonar capilar baixa, índice cardíaco normal ou elevado, resistências vasculares sistêmicas descendentes e necessidade de vasopresor. Um P<0,05 foi considerado significativo. Resultados. Foram incluídos 64 pacientes, 33 deles foram randomizados para MB (dose média de 3,5 mg / kg) e 31 pacientes representaram o grupo controle. Vinte (31,1%) pacientes desenvolveram vasoplegia, 6 (18,2%) pacientes do grupo AM versus 14 (45,2%) pacientes do grupo controle (P=0,01; OR 0,27; IC de 0,08-0,84). A necessidade de vasopressores foi menor nos pacientes que receberam AM 23 (69,7%) versus 30 (96,8%) pacientes (P=0,004; OR 0,07; IC 0,003-0,522). A mortalidade pós-operatória foi de 13 (20,3%) pacientes, 4 (12,1%) deles recebendo AM versus 9 (29%) pacientes do grupo controle (P=0,06; OR 0,35; IC 0,106-1,117). Em todos os pacientes tratados, foi evidente uma alteração na cor da urina e também cinco (7,8%) pacientes desenvolveram hipertensão arterial, exigindo vasodilatadores 3 (9,1%) pacientes do grupo AM versus 2 (6,4%) do controle (valor de P=0,3). Conclusões. O uso pré-operatório de AM foi associado à redução da vasoplegia e menor necessidade de vasopresor. Também foi observada redução das complicações pós-operatórias e tendência à redução da mortalidade. Um número superior de pacientes precisa ser avaliado para provar o valor dessa estratégia

Experimental study of the neurotoxic effects of photodynamic therapy on the spinal cord / Estudo experimental dos efeitos neurotóxicos da terapia fotodinâmica na medula espinhal / Estudio experimental de los efectos neurotóxicos de la terapia fotodinámica en la médula espinal

ABSTRACT Objective To evaluate the effects of photodynamic therapy (PDT) on the dura mater using the photosensitizers aluminum chloride phthalocyanine and methylene blue in in vivo assays. Methods Fifty-six male Wistar rats were divided into two groups; one submitted to PDT and the other submitted to the photosensitizers without their photoactivation (control). The photosensitizers were applied to the dura mater after laminectomy at the T10 level. The methods used for assessment were the Basso, Beattie and Bresnahan (BBB) functional evaluation scale and study of the dura mater by light microscopy. Results No changes in motor activity were observed in the animals submitted to PDT compared to control. Histological and pathological evaluation did not show any differences between the group exposed to activated photosensitizers and the control group with regard to the inflammatory process and tissue necrosis. Conclusion The joint use of PDT with the photosensitizing pharmaceuticals aluminum chloride phthalocyanine and methylene blue did not induce any clinical neurotoxic effects or histological changes in the dura mater of the animals studied. Level de evidence V; Expert Opnion.

RESUMO Objetivo Avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica (PDT) na dura-máter usando os fotossensibilizadores cloreto de alumínio ftalocianina e azul de metileno em ensaios in vivo. Métodos Cinquenta e seis ratos Wistar machos divididos em dois grupos; um submetido à PDT e o outro submetido aos fotossensibilizadores sem a fotoativação (controle). Os fotossensibilizadores foram aplicados sobre a dura-máter depois de laminectomia no nível T10. Os métodos de avaliação usados foram a escala de avaliação funcional de Basso, Beattie e Bresnahan (BBB) e o estudo da dura-máter por microscopia óptica. Resultados Não foram observadas alterações da atividade motora dos animais submetidos à PDT com relação ao grupo controle. A avaliação histológica e histopatológica não mostrou diferenças entre o grupo exposto aos fotossensibilizadores ativados e o grupo controle, com relação ao processo inflamatório e à necrose tecidual. Conclusões O uso conjunto de PDT e os fármacos fotossensibilizantes cloreto de alumínio ftalocianina e azul de metileno não induziu efeitos neurotóxicos clínicos e/ou alterações histológicas sobre a dura-máter dos animais estudados. Nível de evidência V; Opinião de Especialista.

RESUMEN Objetivo Evaluar los efectos de la terapia fotodinámica (PDT) en la duramadre utilizando los fotosensibilizadores de ftalocianina de aluminio clorada y azul de metileno en ensayos in vivo. Métodos Cincuenta y seis ratas Wistar machos se dividieron en 2 grupos; uno fue sometido a PDT y el otro sometido a fotosensibilizadores sin fotoactivación (control). Los fotosensibilizadores se aplicaron a la duramadre después de la laminectomía en el nivel T10. Los métodos de evaluación utilizados fueron la escala de evaluación funcional de Basso, Beattie y Bresnahan (BBB) y el estudio de la duramadre mediante microscopía óptica. Resultados No hubo cambios en la actividad motora de los animales sometidos a PDT en relación con el grupo de control. La evaluación histológica e histopatológica no mostró diferencias entre el grupo expuesto a fotosensibilizadores activados y el grupo de control con respecto al proceso inflamatorio y la necrosis tisular. Conclusiones El uso conjunto de PDT con las sustancias fotosensibilizadores ftalocianina de aluminio clorada y azul de metileno no indujo efectos neurotóxicos clínicos o cambios histológicos en la duramadre de los animales estudiados. Nivel de evidencia V; Opinión del Especialista.

Adsorção do azul de metileno em serragem de Pinus elliottii (pinus) e Drepanostachyum falcatum (bambu) / Methylene blue adsorption in Pinus elliottii (pine) and Drepanostachyum falcatum (bamboo) sawdust

RESUMO A cinética, o equilíbrio e os parâmetros termodinâmicos de adsorção foram investigados para a adsorção do corante azul de metileno (AM) por meio dos biossorventes Pinus elliottii (pinus) e Drepanostachyum falcatum (bambu). A cinética de adsorção foi descrita mais precisamente pelo modelo de pseudossegunda ordem, os dados de equilíbrio monocomponente foram mais bem representados pela isoterma de Langmuir, para as três temperaturas estudadas (15, 25 e 35°C), e os parâmetros termodinâmicos demonstraram que o processo de adsorção é exotérmico, de natureza química e não espontâneo. A máxima capacidade adsortiva do pinus foi de 47 mg L-1 e a do bambu, de 38 mg L-1 para os ensaios de adsorção realizados com AM (100 mg L-1 a 35°C). Por fim, os biossorventes foram considerados promissores para a remoção do adsorvato AM em matriz aquosa sob valor de pH próximo à neutralidade (6,5).

ABSTRACT Kinetics, equilibrium and thermodynamic adsorption parameters were investigated for the adsorption of the methylene blue dye (MB) by means of the biosorbents Pinus elliottii (pinus) and Drepanostachyum falcatum (bamboo). The adsorption kinetics were described more precisely by the pseudo-second order model; the monocomponent equilibrium's data were better represented by the Langmuir isotherm for the three temperatures studied (15, 25 and 35°C) and the thermodynamic parameters showed the adsorption process is exothermic, of a chemical nature and not spontaneous. The maximum adsorptive capacity of pinus was 47 mg L-1 and 38 mg L-1 bamboo for adsorption tests performed with MB (100 mg L-1 at 35°C). Finally, the biosorbents were considered promising for the adsorbate MB removal in aqueous matrix under pH value close to neutrality (6.5).

Preparo de curva padrão para inativação térmica da cepa de levedura comercial Saccharomyces cerevisiae WB-06 / Standard curve preparation for thermal inactivation of yeast commercials strain Saccharomyces cerevisiae WB-06

Na produção industrial de alimentos se faz necessário a inativação de microrganismos. O tipo mais comum empregado em produtos alimentícios, especialmente em bebidas fermentadas, é a levedura Saccharomyces cerevisiae. As técnicas de inativação mais empregadas consistem no aquecimento abrupto. Tal processo térmico altera propriedades sensoriais e nutritivas do produto final, devendo ocorrer de forma controlada, otimizando o tempo de operação. Neste artigo, com fim de obter parâmetros de resistência térmica da cepa comercial de levedura S. cerevisiae WB-06 foram feitos cultivos do microrganismo em meio líquido açucarado para posterior aquecimento a 60 ºC em banho térmico. A amostragem foi feita em intervalos de até 15 minutos. O valor obtido de tempo de redução decimal (D60) de 9,80 min está de acordo com a literatura.

Seleção de carvões ativados para adsorção de microcistinas / Selection of activated carbons for adsorption of microcystins

RESUMO A presença das cianobactérias é uma das grandes preocupações para o tratamento de água, uma vez que esses microrganismos podem ser produtores de metabólitos tóxicos, como as microcistinas (MCs), que não são efetivamente removidas no tratamento usualmente empregado de ciclo completo. Para a remoção dessas toxinas, pode-se, de forma complementar, utilizar adsorvedores como o carvão ativado (CA), que apresenta eficiência variada, em função de suas características. Este trabalho teve como objetivo fornecer subsídios técnicos e científicos para a seleção de carvões ativados pulverizados (CAPs) e carvões ativados granulares (CAGs) como adsorvedores de MCs. Para tanto, foi realizado, primeiramente, um experimento de seleção de CAs com maior capacidade adsortiva para MCs, em escala de bancada. Em seguida, para os CAPs e CAGs selecionados, foi realizada caracterização complementar para a distribuição de volume específico em função do tamanho do poro. Posteriormente, foram elaboradas isotermas de adsorção de Freundlich e curvas de ruptura. Pôde-se constatar que, dentre os CAs amostrados, os importados apresentaram maior capacidade adsortiva para MCs do que os nacionais. Além disso, foi possível concluir que a escolha do CA pode ser determinada pelos parâmetros índice de azul de metileno (IAM), volume de mesoporos e coeficiente Kf, associados aos resultados do experimento de seleção, considerado uma ferramenta técnica alternativa de simples aplicação e suficiente para esse fim.

ABSTRACT The presence of cyanobacteria is a major concern for water treatment, since these microorganisms can be toxic metabolic producers, such as microcystins (MCs), which are not effectively removed in the usually employed full cycle treatment. In order to remove these toxins, it is possible to use absorbers such as activated carbon (AC), which presents a varied efficiency, depending on its characteristics. The general objective of this research was to provide technical and scientific subsidies for the selection of powdered activated carbons (PACs) and granular activated carbons (GACs) in relation to the adsorption of microcystins. A bench scale experiment was carried out to select activated carbons with higher adsorptive capacity for microcystins. Then, for the selected PACs and GACs, complementary characterization was performed for the specific volume distribution as function of pore size and, afterwards, Freundlich adsorption isotherms and breakthrough curves were elaborated. It was possible to verify that among the sampled activated carbons, the imported ones presented greater adsorption capacity for microcystins in relation to the nationals. In addition, it was possible to conclude that the selection of an activated carbon can be done regarding methylene blue index (MBI) parameters, volume of mesoporous and Kf, associated to the selection experiment's results, considered an alternative technical tool of simple application and sufficient for this purpose.

Does methylene blue attenuate inflammation in nonischemic lungs after lung transplantation? / O azul de metileno atenua a inflamação em pulmões não isquêmicos após transplante pulmonar?

ABSTRACT Objective: To evaluate whether methylene blue (MB) could minimize the effects of ischemia-reperfusion injury in the nonischemic lung on a lung transplantation rodent model. Methods: Forty female Sprague-Dawley rats were divided into 20 donors and 20 recipients. The 20 recipient rats were divided into two groups (n = 10) according to the treatment (0.9% saline vs. 1% MB solutions). All animals underwent unilateral lung transplantation. Recipients received 2 mL of saline or MB intraperitoneally prior to transplantation. After 2 h of reperfusion, the animals were euthanized and histopathological and immunohistochemical analyses were performed in the nonischemic lung. Results: There was a significant decrease in inflammation-neutrophil count and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) expression in lung parenchyma were higher in the saline group in comparison with the MB group-and in apoptosis-caspase-3 expression was higher in the saline group and Bcl-2 expression was higher in MB group. Conclusions: MB is an effective drug for the protection of nonischemic lungs against inflammation and apoptosis following unilateral lung transplantation in rats.

RESUMO Objetivo: Avaliar se o azul de metileno (AM) pode minimizar os efeitos da lesão de isquemia-reperfusão sobre o pulmão não isquêmico em um modelo de transplante pulmonar em roedores. Métodos: Quarenta ratas Sprague-Dawley foram divididas em 20 doadoras e 20 receptoras. As 20 ratas receptoras foram divididas em dois grupos (n = 10) de acordo com o tratamento (solução salina a 0,9% vs. AM a 1%). Todos os animais foram submetidos a transplante pulmonar unilateral. As receptoras receberam 2 ml de solução salina ou de AM por via intraperitoneal antes do transplante. Após 2 h de reperfusão, os animais foram sacrificados, e foram realizadas análises histopatológicas e imuno-histoquímicas no pulmão não isquêmico. Resultados: Houve diminuição significativa da inflamação - a contagem de neutrófilos e a expressão de intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1, molécula de adesão intercelular-1) foram maiores no grupo salina em comparação com o grupo AM - e da apoptose - a expressão de caspase-3 foi maior no grupo salina, e a expressão de Bcl-2 foi maior no grupo AM. Conclusões: O AM é uma droga eficaz para a proteção de pulmões não isquêmicos contra inflamação e apoptose após transplante pulmonar unilateral em ratos.

Comparative study of metachromatic staining methods in assessing the exfoliative cell types during oestrous cycle in Sprague-Dawley laboratory rats / Estudio comparativo de los métodos de tinción metacromática en la evaluación de los tipos de células exfoliativas durante el ciclo estral en ratas Sprague-Dawley de laboratorio

This study was aimed at comparing the commonly used metachromatic stains viz., Papanicolaou stain, WrightGiemsa, Toluidine blue and Methylene blue in the assessment of cell types of the oestrous cycle in rats. Eight female Sprague-Dawley rats aged 8-9 weeks were used for this assessment. Cotton Swabs were gently inserted in the animals vagina to obtain cells from which they were then transferred to glass slides for staining and evaluation under microscopy. The different cell types were compared for their morphological features and clarity of cellular detail under all four stains. The application, advantages and limitations of all stains were then discussed. It was concluded that the selection of the most effective stain in the assessment of vaginal cytology depends on their application to clinical or research which was based on the cellular detail of interest, time, cost and availability of each staining procedure.

El presente estudio tuvo como objetivo comparar las tinciones metacromáticas comúnmente utilizadas, Wright's-Giemsa, azul de toluidina, azul de metileno y tinción de Papanicolaou, en la evaluación de los tipos de células del ciclo estral en ratas. El estudio se realizó en ocho ratas hembras SpragueDawley, con edades entre 8 y 9 semanas, y se usaron hisopos vaginales de algodón para preparar portaobjetos. Los diferentes tipos de células se compararon por sus características morfológicas y claridad en las cuatro tinciones. La aplicación, ventajas y limitaciones de todas las tinciones fueron discutidas. Se concluye que la selección de la tinción más efectiva en la evaluación de la citología vaginal depende de su uso, es decir, clínico o de investigación, el detalle celular de interés, tiempo, costo y disponibilidad.

Microleakage analysis of dental caries lesions sealed with flow resin and compared to microhybrid resin restorations in dentin / Avaliação da microinfiltração de lesões de cárie dentinárias seladas com resina flow e restauradas com resina microhíbrida

ABSTRACT Objective: To evaluate the sealing of cavities of dentinal occlusal caries lesions, reproduced in vitro, with flow resin compared to cavity restorations presenting healthy dentin using microhybrid composite resin. Methods: The sample consisted of 27 healthy deciduous molars where cavities of approximately 2 mm in the fossa region were performed and occlusal cleft of each tooth were sealed, impermeabilization was performed and the sample was randomly divided into 2 groups: group I underwent cariogenic challenge and occlusal sealing with resin flow. The teeth of group II were restored with microhybrid composite resin. The teeth were immersed in 5% methylene blue for 8 hours at 37° C and washed until all the dye was removed from the surface. The teeth were sectioned in the mesio-distal direction. The penetration of the dye was evaluated: 0- no penetration; 1- dye penetration up to 1/3 of the restoration; 2- dye penetration up to 2/3 of the restoration depth; 3 - penetration of dye into the pulp wall. The results were analyzed by the Biostat 4.0 program. Descriptive analysis and the mode among the examiners submitted to the Mann-Whitney test. Results: There was no significant difference in microleakage between restoration performed in healthy dentin with microhybrid composite resin or maintenance of infected dentin in primary teeth sealed with resin flow (p = 0.6035). Conclusion: It was concluded that the marginal infiltration of primary molars sealed with microhybrid composite resin and resin flow was not influenced by the removal -or not -of the carious tissue or the material used.

RESUMO Objetivo: Avaliar o selamento de cavidades de lesões de cárie oclusais em dentina, reproduzidas in vitro, com resina flow comparando com restaurações em cavidades com dentina hígida utilizando resina composta microhíbrida. Métodos: Foram selecionados 27 molares decíduos hígidos, realizadas cavidades de aproximadamente 2 mm na região de fossa e fissura da face oclusal de cada dente, impermeabilização e divisão em 2 grupos aleatoriamente: grupo I foram submetidos ao desafio cariogênico e selamento oclusal com resina flow. Os dentes do grupo II foram restaurados com resina composta microhíbrida. Os dentes foram imersos em azul de metileno a 5% durante 8 horas a 37 ° C e lavados até que todo o corante fosse removido da superfície. Os dentes foram seccionados no sentido mesio-distal. A penetração do corante foi avaliada: 0- nenhuma penetração; 1- a penetração de corante até 1/3 da restauração; 2- a penetração de corante até 2/3 da restauração profundidade; 3- penetração de corante para a parede pulpar. Os resultados foram analisados pelo programa Biostat 4.0. Foi feita análise descritiva e a moda entre os examinadores submetidas ao teste de Mann-Whitney. Resultados: Não houve diferença significante na microinfiltração entre restauração realizada em dentina hígida com resina composta microhíbrida ou a manutenção da dentina infectada em dentes decíduos selados com resina flow (p=0.6035). Conclusão: A remoção ou não do tecido cariado, assim como o material utilizado, não influenciou na infiltração marginal de molares decíduos selados com resina composta microhíbrida e resina flow.